图显示出不同成分的糖形成了有区别的颜色透明度。这一方法特别适用于定性测定,但也可采纳苔黑素法检测全部糖的成分。比较左图中的几条曲线,说明不同的糖会和同量苔黑素溶液形成不同的颜色深度。这种方法可通过颜色深度或完度值估算出棉纤维中蜜露的含量,如果想用该法定量测定各种不同的糖分,必须使不同的糖分能顺利地通过苔黑素检验。
用不莱梅苔黑素法检测棉纤维上的蜜露时,若棉纤维上蜜露值超过或等于色标上的5时,则有黏性。 不莱梅苔黑素测定法属于全糖测定法。由于糖在分解成糠醛衍生物时,要求的条件比较苛刻,因而该方法的普及性不好。
(二)国内测定法
国内称不莱梅苔黑素测定法为定量法,是参照德国不莱梅的苔黑素试验法进行测定的方法。根据GB/T16258—1996标准,此法是用3,5-二羟基甲苯—硫酸溶液作显色剂,使用分完完度计定量测定棉花含糖量的试验方法。
1.测定原理
在非离子表面活性剂的作用下,使棉纤维上的糖溶于水中,糖在强酸性介质中转化为醛类,和3,5-二羟基甲苯发生显色反应,生成橙黄色化合物,用分完完度计在425nm处和标准工作曲线比较定量。
2.试剂和材料
(1)蒸馏水(下面全部水指蒸馏水)。
(2)硫酸(浓度1.84g/mL)。
(3)3,5-二羟基甲苯。
3,5-二羟基甲苯—硫酸溶液:称取3,5-二羟基甲苯0.2g,置于100mL烧杯中,加入100g(约54mL)硫酸,搅拌使之全部溶化。现用现配。
(4)脂肪酸烷醇酰胺(尼纳尔,工业级)。
①测定用脂肪酸烷醇酰胺(0.04%)溶液:称取0.4g脂肪酸烷醇酰胺溶于1000mL水中,搅拌均匀。
②提取用脂肪酸烷醇酰胺(0.005%)溶液:量取测定用脂肪酸烷醇酰胺溶液100mL,溶于700mL水中,搅拌均匀。
(5)D-果糖。
①糖标准储备溶液:称取D-果糖0.200g,用水溶化后转入100mL容量瓶中,用水稀释至刻度。浓度为2.0mg/mL。
②糖标准工作溶液:用移液管吸取0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL糖标准储备溶液,分别注入50mL容量瓶中,用水稀释至刻度,该糖标准系列浓度分别为0１020mg/mL、0.040mg/mL、0.060mg/mL、0.080mg/mL、0.10mg/mL、0.12mg/mL、0.16mg/mL、0１20mg/mL。
3.主要仪器及器具
(1)分完完度计:波长200～800nm。
(2)天平:分度值0.01g、0.001g。
(3)振荡器:>200次/min。
(4)恒温水浴锅。
(5)250mL磨
4.试验样液打算
(1)试验室样品:按GB6097—1985规定抽取实验室样品。
(2)试验样品:从实验室样品中随机抽取不少于15g的试验样品。
(3)试验试料:去除试验样品中粗大杂质,充分混合(或用混样品),从中称取3份作为试料,每份试料重2.0g±0.1g。余样备用。
5.测定步骤
(1)试样溶液的配制:取3份试料,分别置于250mL锥形瓶中。加入0.005%脂肪酸烷醇酰胺溶液200mL,在振荡器上振荡10min。用玻璃棒将棉花翻过后继续振荡10min,用定量滤纸过滤,得到3份试料溶液。
(2)空白试验:吸取0.04%脂肪酸烷醇酰胺溶液1.0mL,注于25mL比色管中。将比色管置于70℃恒温水浴锅中,快速加入3,5-二羟基甲苯—硫酸溶液2.0mL,摇匀,继续置于水浴锅中40min,取出,加入0.04%脂肪酸烷醇酰胺溶液20mL,摇匀,冷却至室温,用0.04%脂肪酸烷醇酰胺溶液定容至刻度。将仪器调整好,在425nm波长处测定溶液的吸完值,记录其读数,保留两位小数。
(3)工作曲线绘制:吸取糖标准工作溶液各1.0mL,注于25mL比色管中。重复步骤(2)。
以吸完值为纵坐标、糖的标准工作溶液浓度(mg/mL)为横坐标绘制工作曲线。
6.结果计算
用试料溶液的吸完值减去空白溶液的吸完值,在工作曲线上查出试料溶液的浓度,按下式计算糖的含量。

式中:X———试料含糖率;
c———在标准曲线上查得试料溶液中糖的浓度值,mg/mL;200———预处理试料时所加脂肪酸烷醇酰胺溶液量,mL;2×1000———试料重量,mg。
所得结果修约至两位小数。以三次试验结果的算术平均值作为该试料的平均含糖量。本方法适用于棉纤维所含全糖的定量测定,是测定棉纤维含糖比较精确的一种方法。

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